材料：質粒DNA指數生長的(de)真核細(xi)(xi)(xi)胞(bao)PEI（聚乙烯亞胺）1×HBS（pH7.4）配方：PEI儲(chu)存(cun)液（100μM）：稱取125mgPEI粉末(mo)溶(rong)解于(yu)(yu)(yu)(yu)50ml1×HBS（pH7.4）中，0.2μm濾膜過濾，儲(chu)存(cun)于(yu)(yu)(yu)(yu)4℃備用(yong)。1×HBS（pH7.4）：將8.76gNaCl溶(rong)解于(yu)(yu)(yu)(yu)900ml超純水，加入(ru)20ml1M的(de)HEPES，調pH值到7.4，定容至1L，過濾（0.2μm濾膜）后儲(chu)存(cun)于(yu)(yu)(yu)(yu)4℃備用(yong)。方法：1．細(xi)(xi)(xi)胞(bao)分盤：通過胰酶消化收集細(xi)(xi)(xi)胞(bao)，用(yong)適當的(de)完(wan)全(quan)培養(yang)基(ji)(ji)以4×105至8×105細(xi)(xi)(xi)胞(bao)/cm2的(de)密度平鋪細(xi)(xi)(xi)胞(bao)于(yu)(yu)(yu)(yu)60mm組織培養(yang)皿(min)上（根據實驗需(xu)要選擇培養(yang)皿(min)，使細(xi)(xi)(xi)胞(bao)貼(tie)壁(bi)后所占總面積達(da)到培養(yang)皿(min)面積的(de)70-90％）。根據細(xi)(xi)(xi)胞(bao)貼(tie)壁(bi)情況于(yu)(yu)(yu)(yu)含5％CO2的(de)37℃溫箱中孵育8-24h,當細(xi)(xi)(xi)胞(bao)貼(tie)壁(bi)完(wan)全(quan)后即(ji)可開(kai)始轉(zhuan)(zhuan)(zhuan)染(ran)。轉(zhuan)(zhuan)(zhuan)染(ran)前換入(ru)2mL預熱的(de)無(wu)血清培養(yang)基(ji)(ji)。更(geng)多關(guan)于(yu)(yu)(yu)(yu)PEI轉(zhuan)(zhuan)(zhuan)染(ran)試(shi)(shi)劑(ji)相關(guan)產品技術(shu)問題，歡(huan)迎咨詢上海曼博生物。如(ru)想申(shen)請PEI試(shi)(shi)用(yong)裝(zhuang)，請關(guan)注(zhu)我們的(de)公眾(zhong)號(hao)：Mine-bio，回復關(guan)鍵詞“PEI申(shen)請”，即(ji)可參加！分子量為25000的(de)線性PEI轉(zhuan)(zhuan)(zhuan)染(ran)試(shi)(shi)劑(ji)即(ji)Polysciences23966轉(zhuan)(zhuan)(zhuan)染(ran)效率(lv)比(bi)較高.福建PEI MAXPEI轉(zhuan)(zhuan)(zhuan)染(ran)試(shi)(shi)劑(ji)試(shi)(shi)用(yong)裝(zhuang)

產(chan)品(pin)特(te)點：PEIMAX40K是(shi)線性(xing)聚(ju)乙烯亞胺(an)鹽(yan)酸鹽(yan)形(xing)式(shi)（LinearPolyethylenimineHydrochloride），是(shi)線性(xing)化(hua)(hua)聚(ju)乙烯亞胺(an)PEI25K的(de)升(sheng)級產(chan)品(pin)。相比(bi)于(yu)PEI25K，PEIMAX40K：1.完(wan)全水解（去乙酰化(hua)(hua)）；2.鹽(yan)酸鹽(yan)形(xing)式(shi)，具更(geng)高的(de)水溶特(te)性(xing)；3.含(han)更(geng)長連續性(xing)乙烯亞胺(an)片(pian)段(duan)，其質子化(hua)(hua)氮(dan)水平(ping)比(bi)PEI25K提高11%以(yi)上。應(ying)用領(ling)域(yu)：PEIMAX40K（cat#24765）是(shi)一款非GMP等級的(de)PEI轉(zhuan)(zhuan)染試(shi)劑(ji)(ji)，適用于(yu)基礎學(xue)術研(yan)究和藥物研(yan)發早期階段(duan)，以(yi)固體粉末形(xing)式(shi)提供，需(xu)用戶自行配置（詳(xiang)情見使用方法）。如想申(shen)請(qing)PEI試(shi)用裝，請(qing)關注我們的(de)公(gong)眾號：Mine-bio，回復關鍵詞“PEI申(shen)請(qing)”，即可參加！福建(jian)PEI MAXPEI轉(zhuan)(zhuan)染試(shi)劑(ji)(ji)試(shi)用裝PEI轉(zhuan)(zhuan)染試(shi)劑(ji)(ji)可以(yi)轉(zhuan)(zhuan)染哪些(xie)細胞？

接種細(xi)(xi)胞(bao)(bao)：轉(zhuan)(zhuan)染(ran)(ran)(ran)前(qian)，用(yong)膠原酶（WORTHINGTONG公司(si)LS004196)消化(hua)細(xi)(xi)胞(bao)(bao)并(bing)計數（不建議用(yong)胰酶）。調整細(xi)(xi)胞(bao)(bao)濃度，將(jiang)細(xi)(xi)胞(bao)(bao)鋪(pu)入(ru)細(xi)(xi)胞(bao)(bao)培(pei)(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)的(de)(de)器皿，每個孔(kong)置(zhi)入(ru)的(de)(de)細(xi)(xi)胞(bao)(bao)量(liang)應能(neng)使轉(zhuan)(zhuan)染(ran)(ran)(ran)時(shi)細(xi)(xi)胞(bao)(bao)匯合(he)(he)度達到70~80%。2.準備DNA-PEI復合(he)(he)物(wu)(wu)(wu)：DNA、PEI試(shi)(shi)(shi)(shi)劑(ji)和稀釋(shi)劑(ji)在進行以(yi)下步驟(zou)前(qian)需(xu)(xu)先使其升至(zhi)室(shi)溫。依據表1所示，用(yong)Opti-MEMITM（Invitrogen）或其他適(shi)(shi)合(he)(he)的(de)(de)無蛋(dan)白培(pei)(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)基(ji)(ji)稀釋(shi)適(shi)(shi)量(liang)DNA。用(yong)同樣的(de)(de)培(pei)(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)基(ji)(ji)稀釋(shi)PEI試(shi)(shi)(shi)(shi)劑(ji)。每1μgDNA需(xu)(xu)用(yong)1.5-5μL線性(xing)PEI轉(zhuan)(zhuan)染(ran)(ran)(ran)試(shi)(shi)(shi)(shi)劑(ji)(這個需(xu)(xu)要(yao)客戶自行摸索配比(bi)，每一(yi)批(pi)轉(zhuan)(zhuan)染(ran)(ran)(ran)試(shi)(shi)(shi)(shi)劑(ji)和每一(yi)批(pi)DNA比(bi)例(li)可(ke)能(neng)會稍(shao)有不同）。一(yi)邊(bian)輕(qing)輕(qing)渦旋裝有DNA溶液的(de)(de)試(shi)(shi)(shi)(shi)管(guan)(guan)(guan)，一(yi)邊(bian)將(jiang)稀釋(shi)的(de)(de)線性(xing)PEI轉(zhuan)(zhuan)染(ran)(ran)(ran)試(shi)(shi)(shi)(shi)劑(ji)滴加(jia)至(zhi)試(shi)(shi)(shi)(shi)管(guan)(guan)(guan)中(zhong)（注意(yi)：請勿顛倒(dao)添加(jia)順序）。充分混勻后，室(shi)溫靜置(zhi)10~25min以(yi)形成DNA-PEI復合(he)(he)物(wu)(wu)(wu)。當(dang)溶液體積較大時(shi)，請用(yong)圓(yuan)底聚丙烯管(guan)(guan)(guan)，例(li)如NEST5mL/14mL離心管(guan)(guan)(guan)。3.轉(zhuan)(zhuan)染(ran)(ran)(ran)細(xi)(xi)胞(bao)(bao)：直接向(xiang)每個孔(kong)中(zhong)加(jia)入(ru)DNA-PEI復合(he)(he)物(wu)(wu)(wu)并(bing)輕(qing)輕(qing)渦旋培(pei)(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)板(ban)/培(pei)(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)皿。在無血(xue)清條件下轉(zhuan)(zhuan)染(ran)(ran)(ran)時(shi)，去除生(sheng)(sheng)長培(pei)(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)基(ji)(ji)，替換成無血(xue)清培(pei)(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)基(ji)(ji)，然(ran)后滴DNA-PEI復合(he)(he)物(wu)(wu)(wu)。轉(zhuan)(zhuan)染(ran)(ran)(ran)1.5h后，添加(jia)?體積的(de)(de)包含30%血(xue)清的(de)(de)生(sheng)(sheng)長培(pei)(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)基(ji)(ji)。更多(duo)關于Polysciences PEI轉(zhuan)(zhuan)染(ran)(ran)(ran)試(shi)(shi)(shi)(shi)劑(ji)，歡迎(ying)咨詢上海(hai)曼(man)博生(sheng)(sheng)物(wu)(wu)(wu)！

對(dui)于(yu)某(mou)些類(lei)型(xing)的(de)細(xi)胞(bao)(bao)如HEK-293、HEK293T、NIH/3T3和COS細(xi)胞(bao)(bao)，在(zai)(zai)轉(zhuan)染(ran)前兩(liang)天(tian)鋪(pu)(pu)板可(ke)顯著提高轉(zhuan)入基因的(de)表達水平。如果選擇(ze)轉(zhuan)染(ran)前兩(liang)天(tian)鋪(pu)(pu)板，可(ke)適(shi)當(dang)降低鋪(pu)(pu)板密度，以確保(bao)轉(zhuan)染(ran)時細(xi)胞(bao)(bao)的(de)匯合度仍為70~80%。2.對(dui)于(yu)接(jie)觸(chu)抑制敏感(gan)的(de)細(xi)胞(bao)(bao)，可(ke)適(shi)當(dang)降低鋪(pu)(pu)板密度。3.即(ji)(ji)使(shi)在(zai)(zai)有(you)蛋白(bai)（如10%的(de)血(xue)清）存(cun)在(zai)(zai)的(de)情況下(xia)，DNA-PEI復(fu)合物(wu)仍能轉(zhuan)染(ran)細(xi)胞(bao)(bao)，但(dan)是DNA-PEI復(fu)合物(wu)必須(xu)在(zai)(zai)無蛋白(bai)存(cun)在(zai)(zai)的(de)條件下(xia)形成。我們推薦使(shi)用(yong)(yong)Opti-MEMITM培養基以達到宜轉(zhuan)染(ran)效率。其他(ta)的(de)無蛋白(bai)培養基則需測試(shi)與線性PEI轉(zhuan)染(ran)試(shi)劑(ji)(ji)的(de)兼容性。4.對(dui)大多數細(xi)胞(bao)(bao)來而言，每1μgDNA使(shi)用(yong)(yong)3.0μLPEIMAX轉(zhuan)染(ran)試(shi)劑(ji)(ji)都能獲得較高轉(zhuan)染(ran)效率。使(shi)用(yong)(yong)者也可(ke)嘗(chang)試(shi)每1μgDNA使(shi)用(yong)(yong)1.5~4μL體積(ji)線性PEIMAX轉(zhuan)染(ran)試(shi)劑(ji)(ji)進行優化。如想(xiang)申請PEI試(shi)用(yong)(yong)裝，請關(guan)注我們的(de)公(gong)眾號：Mine-bio，回復(fu)關(guan)鍵詞“PEI申請”，即(ji)(ji)可(ke)參(can)加！?如何申請PEI試(shi)用(yong)(yong)裝呢？

接(jie)種細(xi)胞(bao)(bao)(bao)：轉(zhuan)(zhuan)(zhuan)(zhuan)(zhuan)染(ran)(ran)前，用(yong)(yong)(yong)膠原酶(mei)（WORTHINGTONG公司LS004196)消(xiao)化(hua)細(xi)胞(bao)(bao)(bao)并計數（不(bu)建(jian)議用(yong)(yong)(yong)胰酶(mei)）。調整(zheng)細(xi)胞(bao)(bao)(bao)濃(nong)度，將細(xi)胞(bao)(bao)(bao)鋪入(ru)細(xi)胞(bao)(bao)(bao)培(pei)養的(de)(de)器皿，每(mei)個孔置(zhi)入(ru)的(de)(de)細(xi)胞(bao)(bao)(bao)量應能(neng)使轉(zhuan)(zhuan)(zhuan)(zhuan)(zhuan)染(ran)(ran)時(shi)細(xi)胞(bao)(bao)(bao)匯合(he)(he)(he)度達到70~80%。2.準備DNA-PEI復(fu)(fu)合(he)(he)(he)物(wu)：DNA、PEI試(shi)(shi)(shi)(shi)劑(ji)(ji)(ji)和(he)(he)稀(xi)釋(shi)劑(ji)(ji)(ji)在進行以(yi)下步驟前需(xu)先使其升至(zhi)(zhi)室溫(wen)。依據表(biao)1所(suo)示(shi)，用(yong)(yong)(yong)Opti-MEMITM（Invitrogen）或其他適(shi)合(he)(he)(he)的(de)(de)無(wu)(wu)蛋白培(pei)養基(ji)稀(xi)釋(shi)適(shi)量DNA。用(yong)(yong)(yong)同樣的(de)(de)培(pei)養基(ji)稀(xi)釋(shi)PEI試(shi)(shi)(shi)(shi)劑(ji)(ji)(ji)。每(mei)1μgDNA需(xu)用(yong)(yong)(yong)1.5-5μL線性(xing)PEI轉(zhuan)(zhuan)(zhuan)(zhuan)(zhuan)染(ran)(ran)試(shi)(shi)(shi)(shi)劑(ji)(ji)(ji)(這個需(xu)要客戶自行摸索配(pei)比，每(mei)一(yi)批轉(zhuan)(zhuan)(zhuan)(zhuan)(zhuan)染(ran)(ran)試(shi)(shi)(shi)(shi)劑(ji)(ji)(ji)和(he)(he)每(mei)一(yi)批DNA比例可(ke)能(neng)會稍有不(bu)同）。一(yi)邊輕輕渦旋裝(zhuang)有DNA溶液的(de)(de)試(shi)(shi)(shi)(shi)管(guan)(guan)，一(yi)邊將稀(xi)釋(shi)的(de)(de)線性(xing)PEI轉(zhuan)(zhuan)(zhuan)(zhuan)(zhuan)染(ran)(ran)試(shi)(shi)(shi)(shi)劑(ji)(ji)(ji)滴(di)加(jia)(jia)(jia)至(zhi)(zhi)試(shi)(shi)(shi)(shi)管(guan)(guan)中(zhong)（注意：請(qing)勿顛倒添加(jia)(jia)(jia)順(shun)序）。充分混勻后(hou)，室溫(wen)靜(jing)置(zhi)10~25min以(yi)形(xing)成(cheng)DNA-PEI復(fu)(fu)合(he)(he)(he)物(wu)。當溶液體積(ji)較大時(shi)，請(qing)用(yong)(yong)(yong)圓底聚丙烯管(guan)(guan)，例如NEST5mL/14mL離心管(guan)(guan)。3.轉(zhuan)(zhuan)(zhuan)(zhuan)(zhuan)染(ran)(ran)細(xi)胞(bao)(bao)(bao)：直接(jie)向每(mei)個孔中(zhong)加(jia)(jia)(jia)入(ru)DNA-PEI復(fu)(fu)合(he)(he)(he)物(wu)并輕輕渦旋培(pei)養板/培(pei)養皿。在無(wu)(wu)血(xue)清(qing)條(tiao)件下轉(zhuan)(zhuan)(zhuan)(zhuan)(zhuan)染(ran)(ran)時(shi)，去(qu)除生長(chang)(chang)培(pei)養基(ji)，替換成(cheng)無(wu)(wu)血(xue)清(qing)培(pei)養基(ji)，然(ran)后(hou)滴(di)DNA-PEI復(fu)(fu)合(he)(he)(he)物(wu)。轉(zhuan)(zhuan)(zhuan)(zhuan)(zhuan)染(ran)(ran)1.5h后(hou)，添加(jia)(jia)(jia)?體積(ji)的(de)(de)包含30%血(xue)清(qing)的(de)(de)生長(chang)(chang)培(pei)養基(ji)。更多關于Polysciences PEI轉(zhuan)(zhuan)(zhuan)(zhuan)(zhuan)染(ran)(ran)試(shi)(shi)(shi)(shi)劑(ji)(ji)(ji)，歡迎咨詢曼(man)博生物(wu)！想(xiang)申(shen)請(qing)PEI試(shi)(shi)(shi)(shi)用(yong)(yong)(yong)裝(zhuang)，請(qing)關注我們的(de)(de)公眾(zhong)號：Mine-bio，回復(fu)(fu)關鍵詞“PEI申(shen)請(qing)”，即可(ke)參加(jia)(jia)(jia)！用(yong)(yong)(yong)PEI轉(zhuan)(zhuan)(zhuan)(zhuan)(zhuan)染(ran)(ran)試(shi)(shi)(shi)(shi)劑(ji)(ji)(ji)時(shi)出(chu)現沉淀是什么原因？湖(hu)北(bei)PEI轉(zhuan)(zhuan)(zhuan)(zhuan)(zhuan)染(ran)(ran)試(shi)(shi)(shi)(shi)劑(ji)(ji)(ji)試(shi)(shi)(shi)(shi)用(yong)(yong)(yong)裝(zhuang)高(gao)回報(bao)的(de)(de)選擇

PEI轉染試(shi)(shi)劑可以轉染HEK293系列。福(fu)建PEI MAXPEI轉染試(shi)(shi)劑試(shi)(shi)用裝

對于某些類型的(de)(de)(de)(de)(de)(de)細(xi)(xi)胞如(ru)HEK-293、HEK293T、NIH/3T3和(he)COS細(xi)(xi)胞，在(zai)轉染(ran)前(qian)(qian)兩(liang)天(tian)鋪板(ban)可顯著(zhu)提高轉入基因的(de)(de)(de)(de)(de)(de)表達(da)水(shui)平。如(ru)果選擇轉染(ran)前(qian)(qian)兩(liang)天(tian)鋪板(ban)，可適(shi)當降低鋪板(ban)密度，以確保轉染(ran)時細(xi)(xi)胞的(de)(de)(de)(de)(de)(de)匯(hui)合(he)(he)度仍(reng)為70~80%。2.對于接(jie)觸抑制敏感的(de)(de)(de)(de)(de)(de)細(xi)(xi)胞，可適(shi)當降低鋪板(ban)密度。3.即(ji)使在(zai)有(you)蛋白（如(ru)10%的(de)(de)(de)(de)(de)(de)血(xue)清）存在(zai)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)情況下，DNA-PEI復合(he)(he)物仍(reng)能轉染(ran)細(xi)(xi)胞，但是DNA-PEI復合(he)(he)物必須在(zai)無蛋白存在(zai)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)條件下形成。我們(men)推薦(jian)使用Opti-MEMITM培(pei)養基以達(da)到(dao)*轉染(ran)效率。其他的(de)(de)(de)(de)(de)(de)無蛋白培(pei)養基則需測試與線性(xing)PEI轉染(ran)試劑(ji)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)兼容性(xing)。更多關(guan)于PEI轉染(ran)試劑(ji)相(xiang)關(guan)產品(pin)技術問(wen)題，歡迎咨詢上(shang)海曼博生(sheng)物!?如(ru)想申(shen)請PEI試用裝，請關(guan)注(zhu)我們(men)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)公眾號(hao)：Mine-bio，回復關(guan)鍵詞“PEI申(shen)請”，即(ji)可參加！?福建PEI MAXPEI轉染(ran)試劑(ji)試用裝

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