注意(yi)事項1.病(bing)毒包(bao)(bao)裝(zhuang)的(de)(de)(de)幾(ji)個關鍵(jian)點主要包(bao)(bao)括：細(xi)(xi)(xi)胞(bao)因素、載體系(xi)統(tong)(盡(jin)量(liang)使(shi)用成(cheng)熟(shu)的(de)(de)(de)商業化(hua)載體系(xi)統(tong))、構建重組的(de)(de)(de)質(zhi)粒正確與否、質(zhi)粒抽(chou)提純化(hua)情況、包(bao)(bao)裝(zhuang)轉染控制(24、48小時的(de)(de)(de)細(xi)(xi)(xi)胞(bao)及熒光狀態判斷)、目的(de)(de)(de)基因對病(bing)毒包(bao)(bao)裝(zhuang)影響(基因大小、序列情況、蛋白功(gong)(gong)能毒性等都會(hui)影響到是否能包(bao)(bao)裝(zhuang)成(cheng)功(gong)(gong))。，需要觀(guan)察包(bao)(bao)裝(zhuang)病(bing)毒后的(de)(de)(de)48h培養(yang)(yang)(yang)基顏色是否橙紅(hong)。3.病(bing)毒濃縮：病(bing)毒一(yi)般(ban)在48h和72h各收(shou)(shou)一(yi)次(ci)。如果不(bu)想濃縮病(bing)毒的(de)(de)(de)話，也可以直(zhi)接(jie)將收(shou)(shou)集(ji)的(de)(de)(de)病(bing)毒上清作為要的(de)(de)(de)細(xi)(xi)(xi)胞(bao)的(de)(de)(de)培養(yang)(yang)(yang)基，但是可能效果會(hui)不(bu)太好。并且一(yi)般(ban)收(shou)(shou)病(bing)毒時，培養(yang)(yang)(yang)基的(de)(de)(de)營(ying)養(yang)(yang)(yang)已經損耗了很(hen)多，那樣直(zhi)接(jie)培養(yang)(yang)(yang)細(xi)(xi)(xi)胞(bao)會(hui)損害細(xi)(xi)(xi)胞(bao)，所以建議(yi)還是進行濃縮后再。常(chang)見問題1.包(bao)(bao)裝(zhuang)病(bing)毒時293T細(xi)(xi)(xi)胞(bao)狀態不(bu)好，或者鋪(pu)得過(guo)密，可以選(xuan)擇放(fang)棄(qi)該(gai)次(ci)實驗。2.目的(de)(de)(de)載體過(guo)大，不(bu)易。3.避免轉染過(guo)程(cheng)(cheng)以及后續過(guo)程(cheng)(cheng)出現的(de)(de)(de)污染。免疫(yi)系(xi)統(tong)，人體的(de)(de)(de)免疫(yi)系(xi)統(tong)由免疫(yi)細(xi)(xi)(xi)胞(bao)、免疫(yi)分子(zi)構成(cheng)。山西病(bing)理(li)科研技術服務(wu)購買

二(er)甲苯(ben)Ⅰ、Ⅱ各15min至透(tou)明。（2）放(fang)(fang)(fang)(fang)入(ru)(ru)(ru)(ru)二(er)甲苯(ben)和石(shi)蠟(la)(la)等(deng)量混合液處理15min，再(zai)放(fang)(fang)(fang)(fang)入(ru)(ru)(ru)(ru)石(shi)蠟(la)(la)Ⅰ、Ⅱ透(tou)蠟(la)(la)各50~60min。透(tou)蠟(la)(la)在(zai)恒溫(wen)(wen)箱內(nei)(nei)進(jin)行，箱內(nei)(nei)溫(wen)(wen)度保(bao)持在(zai)55~60℃左右。4、包(bao)埋(mai)（1）用鑷子(zi)夾取蠟(la)(la)模在(zai)酒(jiu)精(jing)燈(deng)上(shang)稍加(jia)(jia)熱，并倒入(ru)(ru)(ru)(ru)少(shao)許從溫(wen)(wen)箱中(zhong)取出的(de)純石(shi)蠟(la)(la)。（2）再(zai)將(jiang)(jiang)鑷子(zi)在(zai)酒(jiu)精(jing)燈(deng)上(shang)稍加(jia)(jia)熱，夾取材料將(jiang)(jiang)切(qie)(qie)(qie)(qie)面朝下放(fang)(fang)(fang)(fang)入(ru)(ru)(ru)(ru)蠟(la)(la)模中(zhong)，排列整齊，再(zai)放(fang)(fang)(fang)(fang)上(shang)包(bao)埋(mai)盒(he)，輕輕倒入(ru)(ru)(ru)(ru)熔蠟(la)(la)。5、切(qie)(qie)(qie)(qie)片(pian)(pian)(pian)(pian)、展片(pian)(pian)(pian)(pian)、貼片(pian)(pian)(pian)(pian)（1）將(jiang)(jiang)包(bao)埋(mai)好(hao)(hao)的(de)石(shi)蠟(la)(la)塊(kuai)固定在(zai)切(qie)(qie)(qie)(qie)片(pian)(pian)(pian)(pian)機上(shang)，調整厚(hou)度調節器到(dao)所(suo)需的(de)切(qie)(qie)(qie)(qie)片(pian)(pian)(pian)(pian)厚(hou)度，一般為4~6μm。（2）切(qie)(qie)(qie)(qie)下的(de)組(zu)織薄片(pian)(pian)(pian)(pian)要放(fang)(fang)(fang)(fang)到(dao)加(jia)(jia)熱的(de)水(shui)(shui)中(zhong)燙平，再(zai)貼到(dao)載玻片(pian)(pian)(pian)(pian)上(shang)，放(fang)(fang)(fang)(fang)45℃恒溫(wen)(wen)箱中(zhong)烘(hong)干(gan)。二(er)、HE染(ran)色1、脫(tuo)蠟(la)(la)、復水(shui)(shui)（1）保(bao)持水(shui)(shui)浴鍋溫(wen)(wen)度為60℃，將(jiang)(jiang)切(qie)(qie)(qie)(qie)片(pian)(pian)(pian)(pian)放(fang)(fang)(fang)(fang)入(ru)(ru)(ru)(ru)干(gan)燥的(de)染(ran)色缸內(nei)(nei)，放(fang)(fang)(fang)(fang)入(ru)(ru)(ru)(ru)水(shui)(shui)浴鍋中(zhong)，30min至蠟(la)(la)熔化。（2）石(shi)蠟(la)(la)切(qie)(qie)(qie)(qie)片(pian)(pian)(pian)(pian)經(jing)二(er)甲苯(ben)Ⅰ、Ⅱ脫(tuo)蠟(la)(la)各5min，然后(hou)放(fang)(fang)(fang)(fang)入(ru)(ru)(ru)(ru)100%、95%、90%、80%、70%各級(ji)酒(jiu)精(jing)溶液中(zhong)各3~5min，再(zai)放(fang)(fang)(fang)(fang)入(ru)(ru)(ru)(ru)蒸餾(liu)水(shui)(shui)中(zhong)3min，以(yi)便染(ran)料可以(yi)進(jin)入(ru)(ru)(ru)(ru)組(zu)織。2、染(ran)色、脫(tuo)水(shui)(shui)（1）切(qie)(qie)(qie)(qie)片(pian)(pian)(pian)(pian)放(fang)(fang)(fang)(fang)入(ru)(ru)(ru)(ru)蘇木精(jing)中(zhong)染(ran)色約10~30min，用流(liu)水(shui)(shui)沖洗約15min，使切(qie)(qie)(qie)(qie)片(pian)(pian)(pian)(pian)顏色變藍。（2）將(jiang)(jiang)切(qie)(qie)(qie)(qie)片(pian)(pian)(pian)(pian)放(fang)(fang)(fang)(fang)入(ru)(ru)(ru)(ru)1%鹽酸乙(yi)醇液中(zhong)褪(tun)色，幾秒后(hou)見切(qie)(qie)(qie)(qie)片(pian)(pian)(pian)(pian)變紅、顏色較(jiao)淺(qian)即可，后(hou)將(jiang)(jiang)切(qie)(qie)(qie)(qie)片(pian)(pian)(pian)(pian)再(zai)放(fang)(fang)(fang)(fang)入(ru)(ru)(ru)(ru)流(liu)水(shui)(shui)中(zhong)使其(qi)恢(hui)復藍色。（3）切(qie)(qie)(qie)(qie)片(pian)(pian)(pian)(pian)放(fang)(fang)(fang)(fang)入(ru)(ru)(ru)(ru)50%、70%、80%乙(yi)醇中(zhong)各3~5min。寧夏疾(ji)病(bing)模型(xing)科研技術服務外(wai)包(bao)瘤細胞的(de)增殖活性(xing)，從而更好(hao)(hao)地(di)評估腫、瘤的(de)惡(e)性(xing)程度和預后(hou).

原理以(yi)慢(man)(man)病(bing)(bing)毒(du)(du)(du)(du)包裝為(wei)例，主(zhu)要(yao)包括3個(ge)質(zhi)(zhi)粒(li)：質(zhi)(zhi)粒(li)DNA可以(yi)轉(zhuan)錄(lu)(lu)出(chu)慢(man)(man)病(bing)(bing)毒(du)(du)(du)(du)遺傳物質(zhi)(zhi)(RNA)，但不能(neng)翻(fan)譯出(chu)慢(man)(man)病(bing)(bing)毒(du)(du)(du)(du)的(de)(de)(de)外(wai)(wai)殼及蛋(dan)(dan)(dan)白(bai)(bai)成分(fen)的(de)(de)(de)載體質(zhi)(zhi)粒(li)，其(qi)(qi)同(tong)時含(han)有(you)目的(de)(de)(de)基(ji)(ji)(ji)(ji)因(yin)(yin)和(he)(he)(he)報告基(ji)(ji)(ji)(ji)因(yin)(yin)，psPAX2是(shi)可以(yi)表(biao)(biao)達慢(man)(man)病(bing)(bing)毒(du)(du)(du)(du)外(wai)(wai)殼的(de)(de)(de)質(zhi)(zhi)粒(li)，其(qi)(qi)表(biao)(biao)達產物可通過粘附機制(zhi)更易穿過細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)膜。為(wei)慢(man)(man)病(bing)(bing)毒(du)(du)(du)(du)的(de)(de)(de)膜蛋(dan)(dan)(dan)白(bai)(bai)質(zhi)(zhi)粒(li)，通過脂質(zhi)(zhi)體進行三質(zhi)(zhi)粒(li)共轉(zhuan)到靶細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)基(ji)(ji)(ji)(ji)因(yin)(yin)組(zu)(zu)(zu)中(zhong)，宿主(zhu)基(ji)(ji)(ji)(ji)因(yin)(yin)組(zu)(zu)(zu)在(zai)表(biao)(biao)達時，隨宿主(zhu)基(ji)(ji)(ji)(ji)因(yin)(yin)轉(zhuan)錄(lu)(lu)出(chu)的(de)(de)(de)目的(de)(de)(de)基(ji)(ji)(ji)(ji)因(yin)(yin)RNA與(yu)psPAX2、基(ji)(ji)(ji)(ji)因(yin)(yin)翻(fan)譯出(chu)的(de)(de)(de)蛋(dan)(dan)(dan)白(bai)(bai)組(zu)(zu)(zu)裝為(wei)慢(man)(man)病(bing)(bing)毒(du)(du)(du)(du)。病(bing)(bing)毒(du)(du)(du)(du)進入(ru)細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)后，其(qi)(qi)遺傳物質(zhi)(zhi)RNA逆轉(zhuan)錄(lu)(lu)出(chu)DNA，該基(ji)(ji)(ji)(ji)因(yin)(yin)再整合到靶細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)的(de)(de)(de)基(ji)(ji)(ji)(ji)因(yin)(yin)組(zu)(zu)(zu)中(zhong)，完成轉(zhuan)染(ran)(ran)過程。因(yin)(yin)為(wei)質(zhi)(zhi)粒(li)DNA只能(neng)轉(zhuan)錄(lu)(lu)出(chu)病(bing)(bing)毒(du)(du)(du)(du)RNA和(he)(he)(he)表(biao)(biao)達目的(de)(de)(de)基(ji)(ji)(ji)(ji)因(yin)(yin)卻不能(neng)表(biao)(biao)達出(chu)病(bing)(bing)毒(du)(du)(du)(du)的(de)(de)(de)外(wai)(wai)殼和(he)(he)(he)膜蛋(dan)(dan)(dan)白(bai)(bai)成分(fen)，因(yin)(yin)此其(qi)(qi)不能(neng)像普通的(de)(de)(de)病(bing)(bing)毒(du)(du)(du)(du)一樣在(zai)宿主(zhu)細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)能(neng)反復增殖，故對宿主(zhu)細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)是(shi)無(wu)害(hai)的(de)(de)(de)并且(qie)高(gao)效的(de)(de)(de)將目的(de)(de)(de)基(ji)(ji)(ji)(ji)因(yin)(yin)轉(zhuan)染(ran)(ran)到靶細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)基(ji)(ji)(ji)(ji)因(yin)(yin)組(zu)(zu)(zu)中(zhong)。用途(tu)病(bing)(bing)毒(du)(du)(du)(du)產生(sheng)(sheng)，包裝病(bing)(bing)毒(du)(du)(du)(du)。材料(liao)與(yu)儀器(qi)無(wu)菌1×PBS，對數(shu)期(qi)(qi)293T細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)，細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)計數(shu)器(qi)，病(bing)(bing)毒(du)(du)(du)(du)質(zhi)(zhi)粒(li)(以(yi)慢(man)(man)病(bing)(bing)毒(du)(du)(du)(du)為(wei)例：psPAX2/)，轉(zhuan)染(ran)(ran)試劑(lipMax或(huo)者lipo3000)，Polybrene、病(bing)(bing)毒(du)(du)(du)(du)濃縮液(生(sheng)(sheng)物公司(si)有(you)售)等(deng)。步驟(1)293T細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)鋪板(ban)取(qu)對數(shu)生(sheng)(sheng)長期(qi)(qi)的(de)(de)(de)293T細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)，用的(de)(de)(de)胰蛋(dan)(dan)(dan)白(bai)(bai)酶消(xiao)化293T細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)，計數(shu)。若是(shi)10cm大皿，建議按照10-12×106每皿的(de)(de)(de)數(shu)量將293T細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)均勻鋪入(ru)。若是(shi)6孔板(ban)。

外(wai)(wai)(wai)(wai)泌(mi)(mi)(mi)(mi)(mi)(mi)體(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)作(zuo)為藥(yao)物(wu)(wu)載(zai)(zai)體(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)由于特(te)殊(shu)(shu)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)結(jie)構和循(xun)環方(fang)(fang)(fang)式(shi)，外(wai)(wai)(wai)(wai)泌(mi)(mi)(mi)(mi)(mi)(mi)體(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)作(zuo)為藥(yao)物(wu)(wu)運輸的(de)(de)(de)(de)(de)(de)載(zai)(zai)體(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)具有(you)獨特(te)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)優(you)勢(shi)。例如(ru)外(wai)(wai)(wai)(wai)泌(mi)(mi)(mi)(mi)(mi)(mi)體(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)尺寸分(fen)(fen)布能(neng)夠增強滲透滯留效(xiao)應，從而有(you)選擇性(xing)地深入組(zu)織;其(qi)外(wai)(wai)(wai)(wai)層(ceng)(ceng)磷脂雙分(fen)(fen)子層(ceng)(ceng)可(ke)以(yi)(yi)保護內容物(wu)(wu)不受各種生(sheng)(sheng)物(wu)(wu)酶(mei)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)影響，維(wei)持各種生(sheng)(sheng)物(wu)(wu)分(fen)(fen)子的(de)(de)(de)(de)(de)(de)活性(xing);外(wai)(wai)(wai)(wai)泌(mi)(mi)(mi)(mi)(mi)(mi)體(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)普遍存(cun)在(zai)于各種體(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)液(ye)和組(zu)織中，其(qi)體(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)積小，結(jie)構、組(zu)成(cheng)與細(xi)胞膜類似，導致外(wai)(wai)(wai)(wai)泌(mi)(mi)(mi)(mi)(mi)(mi)體(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)可(ke)以(yi)(yi)在(zai)避開(kai)免(mian)疫系統監督的(de)(de)(de)(de)(de)(de)同時深入組(zu)織內部，有(you)較好(hao)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)生(sheng)(sheng)物(wu)(wu)相容性(xing);當(dang)采用(yong)(yong)內源(yuan)外(wai)(wai)(wai)(wai)泌(mi)(mi)(mi)(mi)(mi)(mi)體(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)時，能(neng)明顯(xian)降(jiang)低(di)其(qi)他藥(yao)物(wu)(wu)載(zai)(zai)體(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)可(ke)能(neng)引(yin)起的(de)(de)(de)(de)(de)(de)有(you)害免(mian)疫反應;除(chu)此之外(wai)(wai)(wai)(wai)，某些(xie)細(xi)胞來源(yuan)或(huo)經特(te)殊(shu)(shu)修飾過的(de)(de)(de)(de)(de)(de)外(wai)(wai)(wai)(wai)泌(mi)(mi)(mi)(mi)(mi)(mi)體(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)具有(you)良好(hao)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)特(te)異性(xing)，可(ke)以(yi)(yi)與特(te)定的(de)(de)(de)(de)(de)(de)或(huo)組(zu)織結(jie)合(he)。因此，載(zai)(zai)藥(yao)成(cheng)為外(wai)(wai)(wai)(wai)泌(mi)(mi)(mi)(mi)(mi)(mi)體(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)研究的(de)(de)(de)(de)(de)(de)一個重要分(fen)(fen)支，具有(you)良好(hao)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)應用(yong)(yong)前景。在(zai)外(wai)(wai)(wai)(wai)泌(mi)(mi)(mi)(mi)(mi)(mi)體(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)中引(yin)入藥(yao)物(wu)(wu)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)方(fang)(fang)(fang)式(shi)包括體(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)內裝(zhuang)載(zai)(zai)和體(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)外(wai)(wai)(wai)(wai)裝(zhuang)載(zai)(zai)兩種。體(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)內藥(yao)物(wu)(wu)裝(zhuang)載(zai)(zai)可(ke)以(yi)(yi)通過傳統方(fang)(fang)(fang)法(如(ru)病毒轉(zhuan)染(ran)、脂質(zhi)體(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)轉(zhuan)染(ran)或(huo)電穿孔等(deng))轉(zhuan)染(ran)來源(yuan)細(xi)胞，編碼(ma)感(gan)興趣(qu)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)RNA或(huo)蛋白(bai)質(zhi)，也(ye)可(ke)以(yi)(yi)使藥(yao)物(wu)(wu)與來源(yuan)細(xi)胞共混(hun)，使細(xi)胞分(fen)(fen)泌(mi)(mi)(mi)(mi)(mi)(mi)產(chan)(chan)生(sheng)(sheng)含有(you)目標生(sheng)(sheng)物(wu)(wu)分(fen)(fen)子的(de)(de)(de)(de)(de)(de)外(wai)(wai)(wai)(wai)泌(mi)(mi)(mi)(mi)(mi)(mi)體(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)。體(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)外(wai)(wai)(wai)(wai)藥(yao)物(wu)(wu)裝(zhuang)載(zai)(zai)則首先(xian)需要得到純化(hua)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)外(wai)(wai)(wai)(wai)泌(mi)(mi)(mi)(mi)(mi)(mi)體(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)，然(ran)后將感(gan)興趣(qu)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)藥(yao)物(wu)(wu)通過電穿孔或(huo)脂質(zhi)體(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)轉(zhuan)染(ran)等(deng)方(fang)(fang)(fang)法裝(zhuang)入純化(hua)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)外(wai)(wai)(wai)(wai)泌(mi)(mi)(mi)(mi)(mi)(mi)體(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)。外(wai)(wai)(wai)(wai)泌(mi)(mi)(mi)(mi)(mi)(mi)體(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)內可(ke)裝(zhuang)載(zai)(zai)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)藥(yao)物(wu)(wu)包括小分(fen)(fen)子化(hua)學藥(yao)物(wu)(wu)、蛋白(bai)質(zhi)和多肽(tai)、核酸藥(yao)物(wu)(wu)、天(tian)然(ran)產(chan)(chan)物(wu)(wu)等(deng)。進(jin)行免(mian)疫沉淀(dian)法時，抗體(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)需要和一個受質(zhi)結(jie)合(he)。

這種(zhong)細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)保(bao)持著其(qi)原(yuan)(yuan)(yuan)始(shi)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)生(sheng)(sheng)(sheng)物(wu)學(xue)特(te)性(xing)，具(ju)(ju)(ju)有(you)(you)高度的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)活(huo)性(xing)和分(fen)(fen)裂能力(li)(li)。原(yuan)(yuan)(yuan)代(dai)細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)在許多生(sheng)(sheng)(sheng)物(wu)醫學(xue)研(yan)(yan)究(jiu)中(zhong)具(ju)(ju)(ju)有(you)(you)重(zhong)(zhong)要(yao)(yao)地(di)位(wei)，包(bao)括藥(yao)物(wu)篩(shai)選(xuan)、疾病模型(xing)(xing)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)建(jian)立以(yi)及(ji)疫苗研(yan)(yan)發等(deng)。原(yuan)(yuan)(yuan)代(dai)細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)獲得通常(chang)是(shi)通過(guo)組(zu)織剪切(qie)、消化或酶解等(deng)方式從(cong)機(ji)體(ti)或組(zu)織中(zhong)分(fen)(fen)離出來(lai)。這些細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)脫離了它們在生(sheng)(sheng)(sheng)物(wu)體(ti)中(zhong)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)環境，但是(shi)仍(reng)然保(bao)持著其(qi)基本的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)生(sheng)(sheng)(sheng)物(wu)學(xue)特(te)性(xing)，包(bao)括細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)膜、細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)核、細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)器以(yi)及(ji)其(qi)他重(zhong)(zhong)要(yao)(yao)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)生(sheng)(sheng)(sheng)物(wu)分(fen)(fen)子。原(yuan)(yuan)(yuan)代(dai)細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)在未經過(guo)傳(chuan)代(dai)培養的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)情(qing)況下，保(bao)持著其(qi)原(yuan)(yuan)(yuan)始(shi)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)生(sheng)(sheng)(sheng)物(wu)學(xue)特(te)性(xing)，因(yin)此，它們常(chang)常(chang)被用(yong)于藥(yao)物(wu)篩(shai)選(xuan)、毒理學(xue)研(yan)(yan)究(jiu)等(deng)。同時，由于原(yuan)(yuan)(yuan)代(dai)細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)具(ju)(ju)(ju)有(you)(you)高度活(huo)性(xing)和分(fen)(fen)裂能力(li)(li)，它們也被用(yong)于組(zu)織工程和再生(sheng)(sheng)(sheng)醫學(xue)中(zhong)，如皮膚移植、骨頭修復和神經再生(sheng)(sheng)(sheng)等(deng)。此外(wai)，原(yuan)(yuan)(yuan)代(dai)細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)模型(xing)(xing)在疾病研(yan)(yan)究(jiu)中(zhong)也扮演著重(zhong)(zhong)要(yao)(yao)角色。由于原(yuan)(yuan)(yuan)代(dai)細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)具(ju)(ju)(ju)有(you)(you)更(geng)高的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)生(sheng)(sheng)(sheng)物(wu)真實性(xing)，使(shi)用(yong)它們建(jian)立的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)疾病模型(xing)(xing)能夠更(geng)準確地(di)模擬(ni)疾病的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)發展(zhan)過(guo)程和藥(yao)物(wu)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)作(zuo)用(yong)機(ji)制，從(cong)而為(wei)(wei)新藥(yao)研(yan)(yan)發和疾病治、療(liao)提供(gong)更(geng)有(you)(you)效的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)工具(ju)(ju)(ju)。總(zong)之，原(yuan)(yuan)(yuan)代(dai)細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)是(shi)一種(zhong)具(ju)(ju)(ju)有(you)(you)高度活(huo)性(xing)和分(fen)(fen)裂能力(li)(li)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)，在生(sheng)(sheng)(sheng)物(wu)醫學(xue)研(yan)(yan)究(jiu)中(zhong)具(ju)(ju)(ju)有(you)(you)重(zhong)(zhong)要(yao)(yao)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)作(zuo)用(yong)。由于其(qi)原(yuan)(yuan)(yuan)始(shi)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)生(sheng)(sheng)(sheng)物(wu)學(xue)特(te)性(xing)。動物(wu)疾病模型(xing)(xing)作(zuo)為(wei)(wei)研(yan)(yan)究(jiu)工具(ju)(ju)(ju)，在探索(suo)疾病發展(zhan)和檢(jian)查的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)過(guo)程中(zhong)發揮了巨(ju)大的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)作(zuo)用(yong)。黑龍(long)江外(wai)包(bao)科研(yan)(yan)技術服(fu)務分(fen)(fen)離

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我(wo)們知道WB實驗步(bu)驟繁瑣，一(yi)(yi)(yi)次實驗歷時(shi)也不短，從提蛋(dan)(dan)(dan)(dan)(dan)白(bai)(bai)到顯(xian)影結束可(ke)能(neng)要(yao)三天，我(wo)們就講一(yi)(yi)(yi)下(xia)這(zhe)里(li)面的(de)(de)一(yi)(yi)(yi)些(xie)關(guan)鍵環(huan)(huan)節(jie)。一(yi)(yi)(yi)、蛋(dan)(dan)(dan)(dan)(dan)白(bai)(bai)提取(qu)及變(bian)性1、提取(qu)蛋(dan)(dan)(dan)(dan)(dan)白(bai)(bai)很多經驗豐富的(de)(de)WB實驗者都深有(you)(you)體(ti)(ti)(ti)會，蛋(dan)(dan)(dan)(dan)(dan)白(bai)(bai)提取(qu)是(shi)影響結重要(yao)的(de)(de)環(huan)(huan)節(jie)之一(yi)(yi)(yi)。該過(guo)程重要(yao)的(de)(de)是(shi)防(fang)降解(jie)和保證(zheng)(zheng)蛋(dan)(dan)(dan)(dan)(dan)白(bai)(bai)濃(nong)度不要(yao)太(tai)低(di)。防(fang)降解(jie)主要(yao)有(you)(you)兩(liang)點，一(yi)(yi)(yi)是(shi)裂(lie)解(jie)前注(zhu)意(yi)(yi)保持樣(yang)(yang)品(pin)處(chu)于(yu)低(di)溫環(huan)(huan)境中，二是(shi)裂(lie)解(jie)時(shi)加(jia)(jia)(jia)入足(zu)夠的(de)(de)蛋(dan)(dan)(dan)(dan)(dan)白(bai)(bai)酶抑制劑。我(wo)們習(xi)慣先用(yong)(yong)冰(bing)(bing)冷的(de)(de)PBS做心臟(zang)的(de)(de)體(ti)(ti)(ti)循環(huan)(huan)灌(guan)注(zhu)，然后(hou)冰(bing)(bing)上(shang)取(qu)腦(nao)，分(fen)(fen)(fen)(fen)離各腦(nao)區(qu)(嗅球，皮層，海馬，中腦(nao)，小(xiao)腦(nao)，延髓，丘腦(nao)，紋狀體(ti)(ti)(ti))后(hou)置于(yu)，用(yong)(yong)液(ye)(ye)氮速凍后(hou)轉移至-80度冰(bing)(bing)箱長期保存。接(jie)著是(shi)保證(zheng)(zheng)蛋(dan)(dan)(dan)(dan)(dan)白(bai)(bai)濃(nong)度，即要(yao)加(jia)(jia)(jia)入適量的(de)(de)裂(lie)解(jie)液(ye)(ye)，加(jia)(jia)(jia)太(tai)少會使蛋(dan)(dan)(dan)(dan)(dan)白(bai)(bai)提取(qu)不充分(fen)(fen)(fen)(fen)，加(jia)(jia)(jia)太(tai)多會讓(rang)蛋(dan)(dan)(dan)(dan)(dan)白(bai)(bai)濃(nong)度太(tai)低(di)，一(yi)(yi)(yi)般經驗是(shi)這(zhe)樣(yang)(yang)的(de)(de)，細(xi)胞樣(yang)(yang)品(pin)例如一(yi)(yi)(yi)個(ge)六孔板的(de)(de)細(xi)胞加(jia)(jia)(jia)60微升(sheng)的(de)(de)裂(lie)解(jie)液(ye)(ye)，動物組織的(de)(de)話每毫克組織加(jia)(jia)(jia)10微升(sheng)裂(lie)解(jie)液(ye)(ye)。還要(yao)加(jia)(jia)(jia)上(shang)超聲破(po)碎處(chu)理(li)，具(ju)體(ti)(ti)(ti)方(fang)案(an)見討論部分(fen)(fen)(fen)(fen)。如果沒(mei)有(you)(you)超聲破(po)碎儀，那就用(yong)(yong)1毫升(sheng)注(zhu)射(she)器不斷(duan)抽吸，冰(bing)(bing)上(shang)反復(fu)抽吸1分(fen)(fen)(fen)(fen)鐘左右，注(zhu)意(yi)(yi)不要(yao)產生過(guo)多氣泡。(需要(yao)灌(guan)注(zhu)取(qu)材的(de)(de)視頻(pin)可(ke)以私聊獲取(qu)，由于(yu)文件過(guo)大(da)，又(you)比較(jiao)血腥，不宜直接(jie)放到文章里(li)。)2、蛋(dan)(dan)(dan)(dan)(dan)白(bai)(bai)變(bian)性加(jia)(jia)(jia)入上(shang)樣(yang)(yang)緩沖液(ye)(ye)后(hou)100攝氏度煮10分(fen)(fen)(fen)(fen)鐘，這(zhe)里(li)的(de)(de)上(shang)樣(yang)(yang)緩沖液(ye)(ye)有(you)(you)兩(liang)種可(ke)選。山西病理(li)科研技術(shu)服務購買

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