這種細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)保(bao)持著其(qi)原(yuan)(yuan)(yuan)(yuan)始(shi)的生(sheng)(sheng)物(wu)(wu)(wu)(wu)學(xue)特性，具(ju)有(you)(you)(you)(you)高(gao)(gao)度的活性和(he)(he)分(fen)(fen)裂能力(li)(li)。原(yuan)(yuan)(yuan)(yuan)代(dai)(dai)(dai)細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)在許多生(sheng)(sheng)物(wu)(wu)(wu)(wu)醫學(xue)研究(jiu)中(zhong)(zhong)(zhong)具(ju)有(you)(you)(you)(you)重(zhong)要地位，包括藥物(wu)(wu)(wu)(wu)篩(shai)選、疾病模(mo)(mo)(mo)型的建立以及(ji)疫苗研發(fa)等(deng)。原(yuan)(yuan)(yuan)(yuan)代(dai)(dai)(dai)細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)的獲得通常是(shi)通過(guo)組(zu)織(zhi)剪切、消化(hua)或(huo)酶解等(deng)方式從機體(ti)(ti)或(huo)組(zu)織(zhi)中(zhong)(zhong)(zhong)分(fen)(fen)離出(chu)來。這些細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)脫離了它(ta)們(men)(men)在生(sheng)(sheng)物(wu)(wu)(wu)(wu)體(ti)(ti)中(zhong)(zhong)(zhong)的環境，但是(shi)仍然保(bao)持著其(qi)基本的生(sheng)(sheng)物(wu)(wu)(wu)(wu)學(xue)特性，包括細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)膜、細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)核、細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)器(qi)以及(ji)其(qi)他(ta)重(zhong)要的生(sheng)(sheng)物(wu)(wu)(wu)(wu)分(fen)(fen)子。原(yuan)(yuan)(yuan)(yuan)代(dai)(dai)(dai)細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)在未經(jing)過(guo)傳(chuan)代(dai)(dai)(dai)培養的情(qing)況下，保(bao)持著其(qi)原(yuan)(yuan)(yuan)(yuan)始(shi)的生(sheng)(sheng)物(wu)(wu)(wu)(wu)學(xue)特性，因(yin)此(ci)，它(ta)們(men)(men)常常被用(yong)于(yu)(yu)(yu)藥物(wu)(wu)(wu)(wu)篩(shai)選、毒理學(xue)研究(jiu)等(deng)。同(tong)時(shi)，由(you)(you)于(yu)(yu)(yu)原(yuan)(yuan)(yuan)(yuan)代(dai)(dai)(dai)細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)具(ju)有(you)(you)(you)(you)高(gao)(gao)度活性和(he)(he)分(fen)(fen)裂能力(li)(li)，它(ta)們(men)(men)也(ye)被用(yong)于(yu)(yu)(yu)組(zu)織(zhi)工程和(he)(he)再(zai)生(sheng)(sheng)醫學(xue)中(zhong)(zhong)(zhong)，如皮膚(fu)移(yi)植、骨頭修復和(he)(he)神(shen)經(jing)再(zai)生(sheng)(sheng)等(deng)。此(ci)外，原(yuan)(yuan)(yuan)(yuan)代(dai)(dai)(dai)細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)模(mo)(mo)(mo)型在疾病研究(jiu)中(zhong)(zhong)(zhong)也(ye)扮(ban)演著重(zhong)要角色。由(you)(you)于(yu)(yu)(yu)原(yuan)(yuan)(yuan)(yuan)代(dai)(dai)(dai)細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)具(ju)有(you)(you)(you)(you)更(geng)(geng)高(gao)(gao)的生(sheng)(sheng)物(wu)(wu)(wu)(wu)真實性，使用(yong)它(ta)們(men)(men)建立的疾病模(mo)(mo)(mo)型能夠(gou)更(geng)(geng)準確地模(mo)(mo)(mo)擬疾病的發(fa)展(zhan)過(guo)程和(he)(he)藥物(wu)(wu)(wu)(wu)的作(zuo)用(yong)機制，從而為新藥研發(fa)和(he)(he)疾病治、療提(ti)供更(geng)(geng)有(you)(you)(you)(you)效的工具(ju)。總之(zhi)，原(yuan)(yuan)(yuan)(yuan)代(dai)(dai)(dai)細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)是(shi)一種具(ju)有(you)(you)(you)(you)高(gao)(gao)度活性和(he)(he)分(fen)(fen)裂能力(li)(li)的細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)，在生(sheng)(sheng)物(wu)(wu)(wu)(wu)醫學(xue)研究(jiu)中(zhong)(zhong)(zhong)具(ju)有(you)(you)(you)(you)重(zhong)要的作(zuo)用(yong)。由(you)(you)于(yu)(yu)(yu)其(qi)原(yuan)(yuan)(yuan)(yuan)始(shi)的生(sheng)(sheng)物(wu)(wu)(wu)(wu)學(xue)特性。細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)污染的處(chu)理的技(ji)術。黑龍江豚鼠科研技(ji)術服務(wu)技(ji)術

外(wai)(wai)(wai)(wai)(wai)泌(mi)體(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)作(zuo)為(wei)藥(yao)(yao)物(wu)(wu)載(zai)(zai)體(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)由于特(te)殊的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)結(jie)構(gou)和(he)循環方(fang)式，外(wai)(wai)(wai)(wai)(wai)泌(mi)體(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)作(zuo)為(wei)藥(yao)(yao)物(wu)(wu)運輸(shu)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)載(zai)(zai)體(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)具有(you)獨(du)特(te)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)優勢。例如(ru)外(wai)(wai)(wai)(wai)(wai)泌(mi)體(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)尺寸(cun)分(fen)(fen)(fen)布能(neng)夠增強(qiang)滲透滯(zhi)留效應(ying)，從而有(you)選(xuan)擇性(xing)(xing)地(di)深入(ru)組(zu)織(zhi);其外(wai)(wai)(wai)(wai)(wai)層磷脂(zhi)雙分(fen)(fen)(fen)子(zi)層可(ke)以(yi)(yi)保護內(nei)(nei)容(rong)物(wu)(wu)不受各(ge)(ge)種生(sheng)(sheng)物(wu)(wu)酶的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)影響，維持各(ge)(ge)種生(sheng)(sheng)物(wu)(wu)分(fen)(fen)(fen)子(zi)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)活性(xing)(xing);外(wai)(wai)(wai)(wai)(wai)泌(mi)體(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)普(pu)遍(bian)存(cun)在(zai)于各(ge)(ge)種體(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)液和(he)組(zu)織(zhi)中(zhong)，其體(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)積小(xiao)，結(jie)構(gou)、組(zu)成與(yu)細(xi)(xi)胞(bao)(bao)膜類似，導致(zhi)外(wai)(wai)(wai)(wai)(wai)泌(mi)體(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)可(ke)以(yi)(yi)在(zai)避(bi)開免疫系(xi)統監(jian)督的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)同時深入(ru)組(zu)織(zhi)內(nei)(nei)部(bu)，有(you)較好的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)生(sheng)(sheng)物(wu)(wu)相容(rong)性(xing)(xing);當采用(yong)內(nei)(nei)源(yuan)外(wai)(wai)(wai)(wai)(wai)泌(mi)體(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)時，能(neng)明(ming)顯降低其他藥(yao)(yao)物(wu)(wu)載(zai)(zai)體(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)可(ke)能(neng)引(yin)(yin)起的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)有(you)害免疫反(fan)應(ying);除此之外(wai)(wai)(wai)(wai)(wai)，某些細(xi)(xi)胞(bao)(bao)來源(yuan)或(huo)經特(te)殊修飾過(guo)(guo)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)外(wai)(wai)(wai)(wai)(wai)泌(mi)體(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)具有(you)良好的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)特(te)異性(xing)(xing)，可(ke)以(yi)(yi)與(yu)特(te)定的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)或(huo)組(zu)織(zhi)結(jie)合。因此，載(zai)(zai)藥(yao)(yao)成為(wei)外(wai)(wai)(wai)(wai)(wai)泌(mi)體(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)研究的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)一(yi)個重要(yao)(yao)分(fen)(fen)(fen)支，具有(you)良好的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)應(ying)用(yong)前景(jing)。在(zai)外(wai)(wai)(wai)(wai)(wai)泌(mi)體(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)中(zhong)引(yin)(yin)入(ru)藥(yao)(yao)物(wu)(wu)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)方(fang)式包(bao)括(kuo)體(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)內(nei)(nei)裝(zhuang)(zhuang)載(zai)(zai)和(he)體(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)外(wai)(wai)(wai)(wai)(wai)裝(zhuang)(zhuang)載(zai)(zai)兩種。體(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)內(nei)(nei)藥(yao)(yao)物(wu)(wu)裝(zhuang)(zhuang)載(zai)(zai)可(ke)以(yi)(yi)通(tong)(tong)過(guo)(guo)傳統方(fang)法(如(ru)病(bing)毒轉(zhuan)染、脂(zhi)質(zhi)體(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)轉(zhuan)染或(huo)電穿孔(kong)等)轉(zhuan)染來源(yuan)細(xi)(xi)胞(bao)(bao)，編(bian)碼(ma)感興趣的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)RNA或(huo)蛋白質(zhi)，也可(ke)以(yi)(yi)使藥(yao)(yao)物(wu)(wu)與(yu)來源(yuan)細(xi)(xi)胞(bao)(bao)共(gong)混(hun)，使細(xi)(xi)胞(bao)(bao)分(fen)(fen)(fen)泌(mi)產生(sheng)(sheng)含有(you)目標(biao)生(sheng)(sheng)物(wu)(wu)分(fen)(fen)(fen)子(zi)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)外(wai)(wai)(wai)(wai)(wai)泌(mi)體(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)。體(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)外(wai)(wai)(wai)(wai)(wai)藥(yao)(yao)物(wu)(wu)裝(zhuang)(zhuang)載(zai)(zai)則首先需要(yao)(yao)得到純化(hua)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)外(wai)(wai)(wai)(wai)(wai)泌(mi)體(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)，然后(hou)將感興趣的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)藥(yao)(yao)物(wu)(wu)通(tong)(tong)過(guo)(guo)電穿孔(kong)或(huo)脂(zhi)質(zhi)體(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)轉(zhuan)染等方(fang)法裝(zhuang)(zhuang)入(ru)純化(hua)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)外(wai)(wai)(wai)(wai)(wai)泌(mi)體(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)。外(wai)(wai)(wai)(wai)(wai)泌(mi)體(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)內(nei)(nei)可(ke)裝(zhuang)(zhuang)載(zai)(zai)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)藥(yao)(yao)物(wu)(wu)包(bao)括(kuo)小(xiao)分(fen)(fen)(fen)子(zi)化(hua)學藥(yao)(yao)物(wu)(wu)、蛋白質(zhi)和(he)多(duo)肽、核酸藥(yao)(yao)物(wu)(wu)、天然產物(wu)(wu)等。天津疾(ji)病(bing)科研技術服務構(gou)建通(tong)(tong)過(guo)(guo)對動物(wu)(wu)模型的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)研究，科研人員可(ke)以(yi)(yi)更(geng)清楚地(di)了解疾(ji)病(bing)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)發(fa)展過(guo)(guo)程和(he)機制(zhi)，為(wei)人類疾(ji)病(bing)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)檢查(cha)提供理論依據。

建(jian)議(yi)按照2×106每孔(kong)的(de)數量將(jiang)293T細胞均勻鋪入(ru)(ru)(ru)。(2)第二(er)天：在(zai)24小(xiao)(xiao)時(shi)之內(nei)，觀(guan)察293T細胞的(de)匯合(he)(he)度在(zai)90%~95%之間時(shi)，向其(qi)(qi)中(zhong)加入(ru)(ru)(ru)DNA-脂(zhi)質(zhi)體(ti)復(fu)合(he)(he)體(ti)，DNA-脂(zhi)質(zhi)體(ti)復(fu)合(he)(he)體(ti)制備方法如下：a)輕(qing)輕(qing)混勻LipoMax，根(gen)據說明書加入(ru)(ru)(ru)相應量于500μlOpti-MEM無(wu)血(xue)清(qing)培養(yang)基(ji)中(zhong)，混合(he)(he)均勻并(bing)置于室溫5分(fen)鐘(zhong)。b)在(zai)500μlOpti-MEM無(wu)血(xue)清(qing)培養(yang)基(ji)中(zhong)稀釋DNA，總質(zhi)量為(wei)15μg按照載體(ti)質(zhi)粒:psPAX2:=4:3:1的(de)比例加入(ru)(ru)(ru)DNA。c)將(jiang)稀釋后的(de)LipoMax和稀釋后的(de)DNA輕(qing)輕(qing)混勻，常溫靜置20分(fen)鐘(zhong)，形成DNA-LipoMax復(fu)合(he)(he)體(ti)。(3)將(jiang)DNA-LipoMax復(fu)合(he)(he)體(ti)輕(qing)柔地滴加至細胞培養(yang)皿中(zhong)，輕(qing)輕(qing)搖晃培養(yang)皿混勻，放(fang)(fang)入(ru)(ru)(ru)細胞培養(yang)箱中(zhong)培養(yang)。(4)病(bing)毒(du)收集(ji)濃縮(suo)病(bing)毒(du)：加入(ru)(ru)(ru)DNA-LipoMax復(fu)合(he)(he)體(ti)48小(xiao)(xiao)時(shi)后，收集(ji)病(bing)毒(du)上(shang)清(qing)，同時(shi)加入(ru)(ru)(ru)10ml預溫的(de)293T培養(yang)基(ji)到細胞培養(yang)皿中(zhong)。將(jiang)收集(ji)到的(de)病(bing)毒(du)上(shang)清(qing)存在(zai)4℃冰箱中(zhong);收集(ji)72小(xiao)(xiao)時(shi)病(bing)毒(du)上(shang)清(qing)，與48小(xiao)(xiao)時(shi)病(bing)毒(du)上(shang)清(qing)混在(zai)一(yi)起。將(jiang)離(li)心(xin)(xin)機溫度降溫到4℃，600g，離(li)心(xin)(xin)5分(fen)鐘(zhong)，去(qu)除(chu)其(qi)(qi)中(zhong)的(de)細胞碎片，上(shang)清(qing)液(ye)(ye)經μm濾(lv)頭過(guo)濾(lv)，加入(ru)(ru)(ru)病(bing)毒(du)濃縮(suo)液(ye)(ye)，配制濃縮(suo)病(bing)毒(du)液(ye)(ye)。將(jiang)濃縮(suo)后的(de)病(bing)毒(du)放(fang)(fang)于4℃冰箱搖床(chuang)上(shang)，旋轉過(guo)夜。第二(er)天，4度離(li)心(xin)(xin)機，3000~4000g離(li)心(xin)(xin)15分(fen)鐘(zhong)。棄掉上(shang)清(qing)液(ye)(ye)，加入(ru)(ru)(ru)1Xpbs或培養(yang)基(ji)重(zhong)懸。

靜置25分鐘(zhong)(zhong)后(hou)(hou)(hou)把(ba)(ba)酒精(jing)倒干，用(yong)吸(xi)水(shui)紙吸(xi)出(chu)(chu)多余的酒精(jing)，然后(hou)(hou)(hou)配壓縮膠(jiao)(jiao)(jiao)，同樣(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)的操作，關鍵是(shi)梳(shu)子(zi)要插得快(kuai)，要小(xiao)心梳(shu)子(zi)下(xia)產生(sheng)氣泡，然后(hou)(hou)(hou)靜置30分鐘(zhong)(zhong)。如果是(shi)當天跑膠(jiao)(jiao)(jiao)，我(wo)(wo)會等上(shang)(shang)(shang)(shang)(shang)(shang)層膠(jiao)(jiao)(jiao)凝2個小(xiao)時(shi)再用(yong)，但(dan)要注意(yi)防干燥縮水(shui)，可(ke)以在(zai)一個小(xiao)時(shi)的時(shi)候(hou)沿著梳(shu)子(zi)上(shang)(shang)(shang)(shang)(shang)(shang)緣加點電泳(yong)液(ye)。所以我(wo)(wo)一般提前(qian)(qian)一晚(wan)制膠(jiao)(jiao)(jiao)，泡于(yu)純水(shui)或者電泳(yong)液(ye)里置于(yu)4度冰箱暫存(cun)。三、蛋(dan)(dan)白(bai)電泳(yong)1、上(shang)(shang)(shang)(shang)(shang)(shang)樣(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)前(qian)(qian)準(zhun)(zhun)備(bei)把(ba)(ba)膠(jiao)(jiao)(jiao)組裝到電泳(yong)芯上(shang)(shang)(shang)(shang)(shang)(shang)，注意(yi)密(mi)閉性(否則(ze)漏液(ye))，如果內槽漏液(ye)就不(bu)是(shi)勻強(qiang)電場了，條帶可(ke)能就不(bu)是(shi)一條直(zhi)線。然后(hou)(hou)(hou)內槽倒滿電泳(yong)液(ye)，拔梳(shu)子(zi)，這一步要小(xiao)心，梳(shu)子(zi)要兩邊一起緩(huan)緩(huan)往(wang)上(shang)(shang)(shang)(shang)(shang)(shang)拔出(chu)(chu)，然后(hou)(hou)(hou)觀察泳(yong)道(dao)內有(you)無脫落的膠(jiao)(jiao)(jiao)粒或者膠(jiao)(jiao)(jiao)絲(si)，有(you)的話(hua)用(yong)1毫升注射器吸(xi)出(chu)(chu)。然后(hou)(hou)(hou)從冰箱取出(chu)(chu)蛋(dan)(dan)白(bai)樣(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)品(pin)(pin)，解(jie)凍(dong)。準(zhun)(zhun)備(bei)振(zhen)蕩(dang)器。2、上(shang)(shang)(shang)(shang)(shang)(shang)樣(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)和電泳(yong)注意(yi)，上(shang)(shang)(shang)(shang)(shang)(shang)樣(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)后(hou)(hou)(hou)蛋(dan)(dan)白(bai)會開始慢慢在(zai)膠(jiao)(jiao)(jiao)中彌散，所以上(shang)(shang)(shang)(shang)(shang)(shang)樣(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)越快(kuai)越好。我(wo)(wo)習慣(guan)先上(shang)(shang)(shang)(shang)(shang)(shang)蛋(dan)(dan)白(bai)Marker,再上(shang)(shang)(shang)(shang)(shang)(shang)蛋(dan)(dan)白(bai)樣(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)品(pin)(pin)，蛋(dan)(dan)白(bai)上(shang)(shang)(shang)(shang)(shang)(shang)樣(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)前(qian)(qian)確保樣(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)品(pin)(pin)完全(quan)解(jie)凍(dong)和充分振(zhen)蕩(dang)(推薦使用(yong)振(zhen)蕩(dang)器振(zhen)蕩(dang))，吸(xi)的時(shi)候(hou)沒(mei)有(you)拉(la)絲(si)即可(ke)，建議(yi)上(shang)(shang)(shang)(shang)(shang)(shang)樣(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)分鐘(zhong)(zhong)把(ba)(ba)樣(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)品(pin)(pin)從冰上(shang)(shang)(shang)(shang)(shang)(shang)取出(chu)(chu)來，不(bu)然樣(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)品(pin)(pin)中SDS可(ke)能會結晶(jing)析(xi)出(chu)(chu)，從而影響(xiang)電泳(yong)效果。上(shang)(shang)(shang)(shang)(shang)(shang)層膠(jiao)(jiao)(jiao)80V25分鐘(zhong)(zhong)，下(xia)層膠(jiao)(jiao)(jiao)120V65分鐘(zhong)(zhong)。四(si)、轉膜1、轉膜前(qian)(qian)準(zhun)(zhun)備(bei)我(wo)(wo)會在(zai)電泳(yong)結束0分鐘(zhong)(zhong)準(zhun)(zhun)備(bei)，把(ba)(ba)轉膜液(ye)配好置于(yu)4度冰箱預冷，然后(hou)(hou)(hou)裁膜，準(zhun)(zhun)備(bei)轉膜裝置。干貨分享 | 避(bi)坑，微(wei)生(sheng)物培養的污染因(yin)素及預防方法(fa)，少走彎路。

3）基(ji)因(yin)(yin)/蛋(dan)(dan)(dan)白(bai)(bai)(bai)質(zhi)(zhi)(zhi)表達(da)定性或(huo)(huo)定量(liang)(liang)檢(jian)(jian)測(ce)(ce)(ce)(ce)(ce)在進(jin)(jin)(jin)行分(fen)(fen)子(zi)(zi)檢(jian)(jian)測(ce)(ce)(ce)(ce)(ce)的(de)(de)過(guo)(guo)程(cheng)中(zhong)，保(bao)持核酸(suan)(suan)和(he)蛋(dan)(dan)(dan)白(bai)(bai)(bai)質(zhi)(zhi)(zhi)的(de)(de)完(wan)整性至關重要，因(yin)(yin)此在取樣(yang)過(guo)(guo)程(cheng)中(zhong)，應盡(jin)量(liang)(liang)避(bi)免核酸(suan)(suan)及(ji)蛋(dan)(dan)(dan)白(bai)(bai)(bai)質(zhi)(zhi)(zhi)的(de)(de)降(jiang)解(jie)。如不注意采樣(yang)過(guo)(guo)程(cheng)，將會(hui)導致(zhi)樣(yang)本中(zhong)的(de)(de)核酸(suan)(suan)及(ji)蛋(dan)(dan)(dan)白(bai)(bai)(bai)質(zhi)(zhi)(zhi)的(de)(de)無(wu)差別降(jiang)解(jie)，嚴重影(ying)(ying)響后續(xu)分(fen)(fen)子(zi)(zi)檢(jian)(jian)測(ce)(ce)(ce)(ce)(ce)結果(guo)。在條件允許(xu)的(de)(de)情況下，樣(yang)本在離體后應立(li)刻裝入凍(dong)存(cun)管內，并(bing)立(li)即放入液氮中(zhong)進(jin)(jin)(jin)行冷凍(dong)。在RNA提取樣(yang)本的(de)(de)保(bao)存(cun)過(guo)(guo)程(cheng)中(zhong)，可以(yi)選擇非(fei)冷凍(dong)型RNA保(bao)存(cun)液或(huo)(huo)Trizol試劑(ji)(ji)進(jin)(jin)(jin)行RNA酶(mei)(mei)的(de)(de)。針對(dui)蛋(dan)(dan)(dan)白(bai)(bai)(bai)質(zhi)(zhi)(zhi)提取樣(yang)本的(de)(de)保(bao)存(cun)，我們同樣(yang)可以(yi)使用(yong)商品(pin)化的(de)(de)蛋(dan)(dan)(dan)白(bai)(bai)(bai)酶(mei)(mei)劑(ji)(ji)進(jin)(jin)(jin)行短期(qi)處(chu)理。聚合酶(mei)(mei)鏈式反應（PolymeraseChnReaction，PCR）及(ji)免印(yin)跡（Westernblotting，WB），這兩種實驗手段(duan)是(shi)分(fen)(fen)子(zi)(zi)學(xue)(xue)檢(jian)(jian)測(ce)(ce)(ce)(ce)(ce)中(zhong)不可或(huo)(huo)缺的(de)(de)一部分(fen)(fen)，也(ye)是(shi)發(fa)表至關重要的(de)(de)分(fen)(fen)子(zi)(zi)檢(jian)(jian)測(ce)(ce)(ce)(ce)(ce)數據。PCR主要用(yong)來(lai)對(dui)基(ji)因(yin)(yin)在基(ji)因(yin)(yin)組(zu)(zu)(zu)層(ceng)面或(huo)(huo)轉錄(lu)層(ceng)面的(de)(de)變化進(jin)(jin)(jin)行定性或(huo)(huo)定量(liang)(liang)檢(jian)(jian)測(ce)(ce)(ce)(ce)(ce)，而WB則主要用(yong)來(lai)對(dui)某一蛋(dan)(dan)(dan)白(bai)(bai)(bai)質(zhi)(zhi)(zhi)的(de)(de)表達(da)進(jin)(jin)(jin)行定量(liang)(liang)檢(jian)(jian)測(ce)(ce)(ce)(ce)(ce)。（4）轉錄(lu)組(zu)(zu)(zu)學(xue)(xue)、蛋(dan)(dan)(dan)白(bai)(bai)(bai)質(zhi)(zhi)(zhi)組(zu)(zu)(zu)學(xue)(xue)及(ji)代謝組(zu)(zu)(zu)學(xue)(xue)檢(jian)(jian)測(ce)(ce)(ce)(ce)(ce)隨著檢(jian)(jian)測(ce)(ce)(ce)(ce)(ce)水平及(ji)相關產業的(de)(de)不斷發(fa)展，各類組(zu)(zu)(zu)學(xue)(xue)檢(jian)(jian)測(ce)(ce)(ce)(ce)(ce)的(de)(de)價格(ge)降(jiang)低，實驗設計(ji)中(zhong)也(ye)常(chang)常(chang)運(yun)用(yong)組(zu)(zu)(zu)學(xue)(xue)檢(jian)(jian)測(ce)(ce)(ce)(ce)(ce)來(lai)提升實驗設計(ji)的(de)(de)檔次(ci)。在我們進(jin)(jin)(jin)行轉錄(lu)組(zu)(zu)(zu)學(xue)(xue)及(ji)蛋(dan)(dan)(dan)白(bai)(bai)(bai)質(zhi)(zhi)(zhi)組(zu)(zu)(zu)學(xue)(xue)的(de)(de)檢(jian)(jian)測(ce)(ce)(ce)(ce)(ce)過(guo)(guo)程(cheng)中(zhong)，同樣(yang)是(shi)要首先(xian)確(que)保(bao)目標RNA或(huo)(huo)蛋(dan)(dan)(dan)白(bai)(bai)(bai)質(zhi)(zhi)(zhi)的(de)(de)片段(duan)完(wan)整性。常(chang)用(yong)于(yu)研究細胞(bao)的(de)(de)成(cheng)瘤(liu)能(neng)力、細胞(bao)的(de)(de)轉移、細胞(bao)的(de)(de)耐(nai)藥(yao)和(he)靶分(fen)(fen)子(zi)(zi)對(dui)腫瘤(liu)細胞(bao)的(de)(de)發(fa)展的(de)(de)影(ying)(ying)響等(deng)等(deng)。浙(zhe)江(jiang)兔科研技術服務購買

純干貨Western blot （WB）條帶(dai)灰度統計與GraphPad作圖(tu).黑龍江豚(tun)鼠科研(yan)技術服務技術

RNA各種(zhong)(zhong)可逆的(de)(de)化學(xue)修(xiu)飾被認為是一(yi)種(zhong)(zhong)新的(de)(de)表(biao)(biao)(biao)觀遺傳調控(kong)方(fang)式(shi)。m6A是真核生物mRNA常見的(de)(de)化學(xue)修(xiu)飾，在(zai)(zai)調控(kong)mRNA穩定性，剪切和(he)翻(fan)譯方(fang)面具(ju)有重要(yao)的(de)(de)作(zuo)用。作(zuo)者使用轉(zhuan)(zhuan)錄(lu)組(zu)測序(xu)發現(xian)了METTL3（甲基(ji)(ji)轉(zhuan)(zhuan)移(yi)酶3），一(yi)種(zhong)(zhong)主要(yao)的(de)(de)RNAN6-腺苷-甲基(ji)(ji)轉(zhuan)(zhuan)移(yi)酶，在(zai)(zai)人(ren)肝(gan)細(xi)胞(bao)(bao)（HCC）和(he)多種(zhong)(zhong)實(shi)(shi)體(ti)中高(gao)表(biao)(biao)(biao)達(da)。在(zai)(zai)臨床上，METTL3的(de)(de)過(guo)度表(biao)(biao)(biao)達(da)與肝(gan)細(xi)胞(bao)(bao)患者不(bu)良預有關。體(ti)外實(shi)(shi)驗證明敲(qiao)(qiao)除METTL3會(hui)抑(yi)(yi)制HCC細(xi)胞(bao)(bao)增(zeng)殖，遷移(yi)及克隆形(xing)成。體(ti)內(nei)實(shi)(shi)驗證明敲(qiao)(qiao)除METTL3會(hui)明顯抑(yi)(yi)制HCC體(ti)內(nei)成瘤和(he)肺轉(zhuan)(zhuan)移(yi)。另外，使用CRISPR/dCas9-VP64系統，內(nei)源性高(gao)表(biao)(biao)(biao)達(da)METTL3會(hui)促進HCC細(xi)胞(bao)(bao)在(zai)(zai)體(ti)外和(he)體(ti)內(nei)生長。通(tong)過(guo)轉(zhuan)(zhuan)錄(lu)組(zu)測序(xu)、m6A-Seq、MeRIP-PCR，作(zuo)者確(que)定了SOCS2（細(xi)胞(bao)(bao)因子(zi)(zi)信號(hao)2的(de)(de)抑(yi)(yi)制因子(zi)(zi)）作(zuo)為METTL3介導的(de)(de)m6A修(xiu)飾的(de)(de)下游靶基(ji)(ji)因。敲(qiao)(qiao)除METTL3表(biao)(biao)(biao)達(da)會(hui)消除SOCS2mRNAm6A修(xiu)飾并增(zeng)強SOCS2mRNA表(biao)(biao)(biao)達(da)。m6A介導的(de)(de)SOCS2mRNA降(jiang)解是依(yi)賴于m6A“讀(du)取器”蛋白YTHDF2。總之，METTL3在(zai)(zai)HCC大部(bu)分高(gao)表(biao)(biao)(biao)達(da)中,并通(tong)過(guo)m6A-YTHDF2依(yi)賴機制抑(yi)(yi)制SOCS2表(biao)(biao)(biao)達(da)從(cong)而(er)促進HCC進展。因此，作(zuo)者發現(xian)了在(zai)(zai)肝(gan)發生過(guo)程中表(biao)(biao)(biao)觀遺傳改變的(de)(de)一(yi)種(zhong)(zhong)新機制。圖4RNA甲基(ji)(ji)化轉(zhuan)(zhuan)移(yi)酶METLLT3在(zai)(zai)肝(gan)組(zu)織(zhi)中高(gao)表(biao)(biao)(biao)達(da)。黑龍江豚(tun)鼠科研(yan)技術(shu)服務技術(shu)

本文(wen)來自四川(chuan)精碳偉業環(huan)保科(ke)技有限責任公司(si)：//wasul.cn/Article/64f28299653.html