用于外(wai)(wai)(wai)泌(mi)體提(ti)取的(de)(de)(de)(de)(de)體液收集(ji)注意事項(xiang)：1、抽(chou)血(xue)(xue)(xue)技巧(qiao)。操作(zuo)(zuo)要輕柔迅速。試(shi)管可翻轉8-10次(ci)使樣(yang)本與(yu)抗凝劑混勻(yun)，避免劇烈(lie)搖晃。混勻(yun)后，將(jiang)試(shi)管固定垂直放置于離心分(fen)離器，在(zai)頂部記錄抽(chou)血(xue)(xue)(xue)的(de)(de)(de)(de)(de)準確時(shi)(shi)(shi)間(jian)(jian)(jian)(jian)，因(yin)(yin)為抽(chou)血(xue)(xue)(xue)與(yu)離心之間(jian)(jian)(jian)(jian)的(de)(de)(de)(de)(de)時(shi)(shi)(shi)間(jian)(jian)(jian)(jian)間(jian)(jian)(jian)(jian)隔可能是(shi)一(yi)個影(ying)(ying)響因(yin)(yin)素。外(wai)(wai)(wai)泌(mi)體在(zai)抽(chou)血(xue)(xue)(xue)后30分(fen)鐘(zhong)內(nei)是(shi)比較穩定的(de)(de)(de)(de)(de)，若(ruo)時(shi)(shi)(shi)間(jian)(jian)(jian)(jian)過長將(jiang)導致外(wai)(wai)(wai)泌(mi)體數量增加。血(xue)(xue)(xue)小板(ban)(ban)極(ji)易因(yin)(yin)抽(chou)血(xue)(xue)(xue)時(shi)(shi)(shi)的(de)(de)(de)(de)(de)物(wu)理(li)因(yin)(yin)素而并釋放出外(wai)(wai)(wai)泌(mi)體，其中(zhong)包括接觸(chu)、壓力、切力。2、抽(chou)血(xue)(xue)(xue)時(shi)(shi)(shi)間(jian)(jian)(jian)(jian)。除了血(xue)(xue)(xue)液黏度，體內(nei)血(xue)(xue)(xue)液的(de)(de)(de)(de)(de)各項(xiang)指(zhi)標在(zai)1天(tian)中(zhong)變化(hua)(hua)(hua)很(hen)大(da)(da)。生理(li)節(jie)律會對(dui)血(xue)(xue)(xue)小板(ban)(ban)的(de)(de)(de)(de)(de)產(chan)生很(hen)大(da)(da)的(de)(de)(de)(de)(de)影(ying)(ying)響。白(bai)細胞(bao)(bao)的(de)(de)(de)(de)(de)募集(ji)和循環系統中(zhong)促(cu)炎細胞(bao)(bao)和細胞(bao)(bao)會隨(sui)時(shi)(shi)(shi)間(jian)(jian)(jian)(jian)變化(hua)(hua)(hua)。大(da)(da)量的(de)(de)(de)(de)(de)具(ju)有特殊表面分(fen)子的(de)(de)(de)(de)(de)微粒(li)也被證(zheng)明(ming)會隨(sui)時(shi)(shi)(shi)間(jian)(jian)(jian)(jian)變化(hua)(hua)(hua)。目(mu)前(qian)尚(shang)(shang)無設(she)計較好(hao)的(de)(de)(de)(de)(de)實驗對(dui)證(zheng)實不(bu)同(tong)時(shi)(shi)(shi)間(jian)(jian)(jian)(jian)血(xue)(xue)(xue)液中(zhong)外(wai)(wai)(wai)泌(mi)體的(de)(de)(de)(de)(de)變化(hua)(hua)(hua)，故(gu)應(ying)在(zai)相(xiang)同(tong)的(de)(de)(de)(de)(de)時(shi)(shi)(shi)間(jian)(jian)(jian)(jian)采集(ji)樣(yang)本。目(mu)前(qian)飲食是(shi)否會對(dui)EV產(chan)生影(ying)(ying)響尚(shang)(shang)未可知(zhi)，但是(shi)由于脂蛋白(bai)可運載RNA且(qie)食物(wu)的(de)(de)(de)(de)(de)攝取可以影(ying)(ying)響循環脂蛋白(bai)顆粒(li)的(de)(de)(de)(de)(de)類(lei)型、數量和作(zuo)(zuo)用，故(gu)抽(chou)血(xue)(xue)(xue)可在(zai)較后一(yi)次(ci)用餐(can)后一(yi)段確定的(de)(de)(de)(de)(de)時(shi)(shi)(shi)間(jian)(jian)(jian)(jian)進行。這些試(shi)劑盒不(bu)需要特殊設(she)備(bei)，隨(sui)著產(chan)品不(bu)斷更新換代，提(ti)取效(xiao)率和純化(hua)(hua)(hua)效(xiao)果(guo)逐漸提(ti)高。金(jin)華(hua)正規外(wai)(wai)(wai)泌(mi)體提(ti)取試(shi)劑廠家(jia)批發(fa)價

外(wai)泌體(ti)(ti)(ti)在肺(fei)(fei)病進(jin)程中(zhong)的(de)作用(yong)：肺(fei)(fei)病細胞來(lai)源(yuan)外(wai)泌體(ti)(ti)(ti)（LCC-exosome）可以通過刺激(ji)一些(xie)病癥(zheng)血管(guan)的(de)形(xing)成來(lai)促(cu)(cu)進(jin)一些(xie)病癥(zheng)的(de)生長。據相(xiang)關報道稱(cheng)，LCC-exosome中(zhong)的(de)miR-210可以通過調節基(ji)質(zhi)細胞中(zhong)酪氨酸受體(ti)(ti)(ti)激(ji)酶A3的(de)含(han)量，促(cu)(cu)進(jin)一些(xie)病癥(zheng)血管(guan)的(de)生成；而(er)(er)LCC-exosome中(zhong)的(de)miR-23a則可以通過啟動(dong)脯氨酰羥化(hua)(hua)酶及壓制緊密(mi)結合蛋(dan)白ZO-1來(lai)促(cu)(cu)進(jin)肺(fei)(fei)病的(de)生血管(guan)作用(yong)。此外(wai)，有研究(jiu)發(fa)現(xian)，外(wai)泌體(ti)(ti)(ti)中(zhong)的(de)內容(rong)物可以觸發(fa)上皮-間質(zhi)轉化(hua)(hua)（EMT）。晚期肺(fei)(fei)病患者(zhe)血清(qing)中(zhong)外(wai)泌體(ti)(ti)(ti)波形(xing)蛋(dan)白表達增加(jia)，促(cu)(cu)使人正(zheng)常支(zhi)氣(qi)管(guan)上皮細胞出現(xian)EMT，從而(er)(er)使肺(fei)(fei)支(zhi)氣(qi)管(guan)正(zheng)常上皮細胞出現(xian)增殖，遷移能力。色譜法。這種方法分離(li)到的(de)外(wai)泌體(ti)(ti)(ti)在電鏡下(xia)大(da)小(xiao)均一，但是(shi)需要特殊(shu)的(de)設備，應用(yong)不普遍(bian)濟(ji)南(nan)外(wai)泌體(ti)(ti)(ti)提取試劑廠家供應獲得的(de)外(wai)泌體(ti)(ti)(ti)純度較高，但步驟(zou)繁瑣，耗(hao)時。

外(wai)(wai)泌體(ti)可通(tong)過流式、WB（檢測指(zhi)標(biao)有CD9,CD63,CD81）、電鏡觀察、NTA粒徑(jing)追蹤(zong)等手段檢測，普(pu)遍應用(yong)于藥物載體(ti)、疾病(bing)(bing)(bing)診斷marker、精細(xi)(xi)醫(yi)療、一些病(bing)(bing)(bing)癥(zheng)(zheng)治病(bing)(bing)(bing)等方面研(yan)究。由于外(wai)(wai)泌體(ti)直徑(jing)小，樣(yang)本含量低，提(ti)(ti)取(qu)十分(fen)困難。已有的(de)外(wai)(wai)泌體(ti)分(fen)離(li)方式有密度(du)梯度(du)離(li)心(xin)(xin)、超(chao)濾(lv)離(li)心(xin)(xin)法(fa)、免(mian)疫(yi)磁珠(zhu)抗體(ti)捕獲、商用(yong)試劑盒(he)等。但到目(mu)前為(wei)止，仍沒有一種提(ti)(ti)取(qu)方法(fa)能同(tong)時保證外(wai)(wai)泌體(ti)的(de)含量、純度(du)以(yi)(yi)及生物活性。外(wai)(wai)泌體(ti)是細(xi)(xi)胞間進行物質運輸和(he)信息交(jiao)流的(de)重要(yao)工具，可以(yi)(yi)通(tong)過調節(jie)免(mian)疫(yi)功能促進一些病(bing)(bing)(bing)癥(zheng)(zheng)的(de)增殖，血(xue)管新生和(he)一些病(bing)(bing)(bing)癥(zheng)(zheng)轉移。與細(xi)(xi)菌(jun)傳染(ran)，幫助細(xi)(xi)菌(jun)逃避(bi)免(mian)疫(yi)關(guan)系(xi)很大(da)，并與心(xin)(xin)血(xue)管疾病(bing)(bing)(bing)，老(lao)年癡呆等疾病(bing)(bing)(bing)具有密切關(guan)系(xi)

外(wai)泌(mi)體(ti)表面(mian)有其特異(yi)性(xing)標記物(wu)（如CD63、CD9蛋白(bai)），用(yong)(yong)包被(bei)抗標記物(wu)抗體(ti)的(de)(de)(de)磁(ci)珠(zhu)(zhu)與外(wai)泌(mi)體(ti)囊泡(pao)孵育后結(jie)合，即可將外(wai)泌(mi)體(ti)吸(xi)附并分(fen)離出來。磁(ci)珠(zhu)(zhu)法(fa)具(ju)有特異(yi)性(xing)高(gao)、操作簡(jian)便、不影響外(wai)泌(mi)體(ti)形態完整等優點，但(dan)是(shi)(shi)效率低(di)(di)，外(wai)泌(mi)體(ti)生(sheng)(sheng)物(wu)活性(xing)易(yi)受(shou)pH和(he)鹽濃度(du)(du)影響，不利于(yu)下(xia)游實(shi)驗，難以普遍普及。聚乙(yi)二醇（PEG）可與疏水(shui)性(xing)蛋白(bai)和(he)脂(zhi)質(zhi)分(fen)子結(jie)合共沉(chen)淀，早(zao)先應用(yong)(yong)于(yu)從(cong)血清等樣本中收集菌類，現在(zai)也被(bei)用(yong)(yong)來沉(chen)淀外(wai)泌(mi)體(ti)，其原理可能與競爭性(xing)結(jie)合游離水(shui)分(fen)子有關。利用(yong)(yong)PEG沉(chen)淀外(wai)泌(mi)體(ti)存在(zai)不少問題(ti)：比如純度(du)(du)和(he)回(hui)收率低(di)(di)，雜(za)(za)蛋白(bai)較多（假陽(yang)性(xing)），顆粒大(da)小(xiao)不均一，產(chan)生(sheng)(sheng)難以去除的(de)(de)(de)聚合物(wu)，機械力(li)或者(zhe)吐(tu)溫(wen)-20等化學添(tian)加物(wu)將會破壞外(wai)泌(mi)體(ti)等，因此發表文章時易(yi)受(shou)質(zhi)疑。如純度(du)(du)和(he)回(hui)收率低(di)(di)，雜(za)(za)蛋白(bai)較多（假陽(yang)性(xing)），顆粒大(da)小(xiao)不均一，產(chan)生(sheng)(sheng)難以去除的(de)(de)(de)聚合物(wu)。色譜(pu)法(fa)。這種方法(fa)分(fen)離到的(de)(de)(de)外(wai)泌(mi)體(ti)在(zai)電鏡下(xia)大(da)小(xiao)均一，但(dan)是(shi)(shi)需(xu)要(yao)特殊的(de)(de)(de)設備，應用(yong)(yong)不普遍。

外(wai)泌(mi)體(ti)(ti)(ti)的(de)(de)(de)形成(cheng)與鑒定(ding)：首先，細(xi)(xi)胞(bao)膜內(nei)(nei)陷形成(cheng)一個(ge)(ge)杯(bei)狀(zhuang)結構，包(bao)括細(xi)(xi)胞(bao)表(biao)面(mian)蛋(dan)(dan)白(bai)(bai)和與細(xi)(xi)胞(bao)外(wai)環(huan)境相(xiang)關的(de)(de)(de)可(ke)(ke)溶性蛋(dan)(dan)白(bai)(bai)，導致早期(qi)胞(bao)內(nei)(nei)體(ti)(ti)(ti)(early-sortingendosome，ESE)的(de)(de)(de)從頭形成(cheng)，或者是杯(bei)狀(zhuang)結構直接和已經存在的(de)(de)(de)ESEs融(rong)合(he)(he)；trans-高爾基體(ti)(ti)(ti)和內(nei)(nei)質網也(ye)能協助形成(cheng)ESEs。ESE成(cheng)熟后(hou)形成(cheng)晚期(qi)胞(bao)內(nei)(nei)體(ti)(ti)(ti)(late-sortingendosomes，LSEs)，較(jiao)(jiao)終形成(cheng)MVBs(也(ye)稱為多(duo)囊內(nei)(nei)小體(ti)(ti)(ti))。MVBs是通過(guo)endosome限制膜向內(nei)(nei)凹(ao)(即質膜雙凹(ao))形成(cheng)的(de)(de)(de)，這一過(guo)程導致MVBs含有(you)多(duo)個(ge)(ge)ILVs。MVB可(ke)(ke)以與溶酶體(ti)(ti)(ti)或自噬體(ti)(ti)(ti)融(rong)合(he)(he)，較(jiao)(jiao)終降解或與質膜融(rong)合(he)(he)釋放作為外(wai)泌(mi)體(ti)(ti)(ti)的(de)(de)(de)ILVs。外(wai)泌(mi)體(ti)(ti)(ti)表(biao)面(mian)蛋(dan)(dan)白(bai)(bai)包(bao)括四聚(ju)體(ti)(ti)(ti)蛋(dan)(dan)白(bai)(bai)、整合(he)(he)蛋(dan)(dan)白(bai)(bai)、免疫(yi)調(diao)節蛋(dan)(dan)白(bai)(bai)等(deng)。外(wai)泌(mi)體(ti)(ti)(ti)可(ke)(ke)以包(bao)含不(bu)(bu)同類(lei)型的(de)(de)(de)細(xi)(xi)胞(bao)表(biao)面(mian)蛋(dan)(dan)白(bai)(bai)、細(xi)(xi)胞(bao)內(nei)(nei)蛋(dan)(dan)白(bai)(bai)、RNA、DNA、氨基酸(suan)和代(dai)謝物。使(shi)用可(ke)(ke)截留100KD分(fen)子(zi)(zi)量的(de)(de)(de)膜，通過(guo)離心截留上清(qing)中的(de)(de)(de)外(wai)泌(mi)體(ti)(ti)(ti)，截留完成(cheng)后(hou)利用不(bu)(bu)同截留相(xiang)對分(fen)子(zi)(zi)質量(MWCO)的(de)(de)(de)超(chao)濾膜對樣品進行選擇性分(fen)離，便可(ke)(ke)獲得外(wai)泌(mi)體(ti)(ti)(ti)。正規(gui)外(wai)泌(mi)體(ti)(ti)(ti)提取試劑銷售廠家(jia)

外(wai)泌體(ti)（Exosome）發現于(yu)1986年，是一種直徑約(yue)30~100nm的雙層膜(mo)囊(nang)泡狀(zhuang)結構(gou)小體(ti)。金(jin)華正規外(wai)泌體(ti)提取試劑(ji)廠(chang)家批發價

外(wai)(wai)(wai)泌(mi)體(ti)(ti)(ti)的生(sheng)物(wu)學功能研究中需(xu)要分(fen)離(li)(li)(li)完整的外(wai)(wai)(wai)泌(mi)體(ti)(ti)(ti)顆粒，而傳(chuan)統超速離(li)(li)(li)心(xin)方法步(bu)驟(zou)繁瑣、硬件要求高(gao)(gao)、操作難度大。李(li)記生(sheng)物(wu)自主開發(fa)的外(wai)(wai)(wai)泌(mi)體(ti)(ti)(ti)快(kuai)速提(ti)(ti)取(qu)試劑盒，組分(fen)經過(guo)優化(hua)處理，適用(yong)(yong)于(yu)(yu)細胞(bao)培(pei)養上清(qing)(qing)液(ye)(ye)、血清(qing)(qing)、血漿、尿液(ye)(ye)及其他(ta)體(ti)(ti)(ti)液(ye)(ye)（腦脊液(ye)(ye)、腹水(shui)、羊(yang)水(shui)、乳汁以(yi)及唾液(ye)(ye)等(deng)）中的外(wai)(wai)(wai)泌(mi)體(ti)(ti)(ti)提(ti)(ti)取(qu)，并(bing)搭配純(chun)(chun)化(hua)過(guo)濾裝(zhuang)置，可快(kuai)速高(gao)(gao)效地獲(huo)得(de)高(gao)(gao)純(chun)(chun)度外(wai)(wai)(wai)泌(mi)體(ti)(ti)(ti)顆粒。注意事項：1.對于(yu)(yu)待測樣品(pin)粘(zhan)度過(guo)大時(shi)，可將(jiang)樣本(ben)用(yong)(yong)4℃預冷的1×PBS緩(huan)沖液(ye)(ye)進行(xing)等(deng)體(ti)(ti)(ti)積稀(xi)釋處理。2.當血清(qing)(qing)、血漿、唾液(ye)(ye)等(deng)樣品(pin)收(shou)獲(huo)的外(wai)(wai)(wai)泌(mi)體(ti)(ti)(ti)濃度較高(gao)(gao)，收(shou)獲(huo)的外(wai)(wai)(wai)泌(mi)體(ti)(ti)(ti)顆粒無法通過(guo)EPF柱(zhu)純(chun)(chun)化(hua)時(shi)，可用(yong)(yong)4℃預冷的1×PBS進行(xing)稀(xi)釋后再通過(guo)EPF柱(zhu)離(li)(li)(li)心(xin)。3.針(zhen)對外(wai)(wai)(wai)泌(mi)體(ti)(ti)(ti)標志蛋白（CD63,CD9,CD81等(deng)）進行(xing)Westernblot檢測，可以(yi)鑒定所提(ti)(ti)的外(wai)(wai)(wai)泌(mi)體(ti)(ti)(ti)。通過(guo)超速離(li)(li)(li)心(xin)(120000g/分(fen)鐘)20小時(shi)以(yi)上才(cai)能獲(huo)得(de)足夠(gou)的外(wai)(wai)(wai)泌(mi)體(ti)(ti)(ti)量。金華正規外(wai)(wai)(wai)泌(mi)體(ti)(ti)(ti)提(ti)(ti)取(qu)試劑廠家批發(fa)價

本文來自四川精碳偉業環保科技有限責任(ren)公司：//wasul.cn/Article/91e31599593.html